Jeffrey Cross
Jeffrey Cross

KAKO - Izolirati amnionske matične celice iz posteljice doma

Attila piše s tem, kako naj izolira solate amnijske matične celice iz placente, doma - to bi moralo povzročiti veliko pogovorov… preverite, celotne korake in se pogovorite!

»Placenta je zelo dragoceno človeško tkivo, čeprav pravilno recikliranje ni placentophagy, ampak izolirati matične celice iz amnionske plasti in jih shraniti za kasnejše regenerativne namene za vso družino. Človeške amnionske epitelne celice (HAEC) iz placente so nadomestne nadomestke človeških izvornih celic in imajo potencial za diferenciacijo na vse tri zarodne plasti in vitro. Te celice so zelo blizu tistim prejšnjim in široko multipotentnim matičnim celicam, pridobljenim z amniotično tekočino, ki so v zadnjem času naredile velik buzz na spletu, ki so jih izdali De Coppi, Atala et al. v Biotehnologiji narave. Tukaj bi rad pokazal, čeprav ne zagotavljam nobene garancije in ne morem zagotoviti nobenega jamstva, da izolacija matičnih celic iz placente ni težja kot izdelava zrezka in z ustrezno pripravo, investicijo in časom lahko to storite tudi pri doma ali v laboratoriju za najemnino. Postopek je etično nesporno, ker se posteljica po rojstvu običajno zavrže. Danes je terapija z matičnimi celicami le obetajoča možnost, vendar v ne tako daljni prihodnosti lahko samozavedajoči se državljani upravljajo z lastnimi matičnimi celicami, jih gojijo v garaži in jih shranijo v hladilnik. Če je tako, bi to lahko bila oblika samostojnega zdravstvenega samozavarovanja. Mi smo na začetku gibanja biodijih, ki ga podpira odprtokodna znanost za ljudi. Uporabili smo vprašanje o biologiji Make Backyard, ker je izumil osnovni jezik bioDIY ali domače ali garažne biotehnologije. Tukaj je algoritem na risanki in spodaj so podrobni, čeprav ne samoregulativni tekstualni protokol. Več podrobnosti bo prišlo kasneje, če bo to potrebno. "

Preostali del slike in informacije po skoku… Povezava do slike v polni velikosti - tukaj.

1. Googlise človeške amnijske matične celice in potencial zdravljenja z matičnimi celicami. To ni dejstvo, ampak obetavna možnost.

2. Posvetujte se s strokovnjakom o celotnem polju (ta korak lahko preskočite, če ste samozavestni).

3. Pogovorite se z nosečo družino (ali vašimi znanci) mesece pred rojstvom in jo prepričajte, naj hrani plodne celice doma.

4. Posvetujte se z njenim ginekologom mesece pred rojstvom in ga prepričajte, naj postavi posteljico ob rojstvu v sterilno bučko, polno ledu. Lahko ga damo v fosfatno pufrano slano raztopino (PBS, pripravek) z nekaterimi antibiotiki (penicilin-streptomicin) zaradi sterilnosti.

5. Tehnične priprave (nisem izračunal natančnega zneska denarja, ki je potreben za pustolovščino, ampak je okoli nekaj tisoč dolarjev, in to bi lahko ceneje kot zbiranje celic na komercialni način): postavite sterilno kapuco na v vaši garaži. Lahko naredite eno iz gospodinjskega čistilnika zraka, za to si oglejte Home Mycology Lab Philipa Rossa, v vprašanju biologije v dvorišču, stran 102. Najemite ali kupite običajni svetlobni mikroskop (10x ločljivost bo dovolj), centrifuga (1000rpm) in kupite hladilnik s tekočim dušikom.

6. Ko je posteljica v roki, jo obdelajte v 4 urah. Uporabite sterilne rokavice.

7. Steklenico postavimo s posteljico pod sterilno kapuco. Vzemite sterilno škarje in previdno odrežite zunanji sloj epitela. Več ko rezaš, več matičnih celic dobiš. Amnionski sloj se mehansko odlepi od horiona.

8. Amnion v fosfatni pufrni fiziološki raztopini (PBS, pripravek) speremo večkrat (8-10X), da odstranimo kri.

9. S sterilnim škarjami temeljito narežemo na tkivo.

10. Za sprošcanje amnionskih epitelijskih celic mleto amnionsko membrano inkubirajte z tripsinom (0,05%) 10 minut pri 37 ° C. Po desetih minutah izvlecite prebavljeno tkivo iz tripsina in zavrzite celice iz te razgradnje, da izkljucite ostanke. Obstajajo različne vrste tripsinizacijskega protokola, tukaj sledim Miki et al.

11. Preostalo tkivo obdelamo v drugi epruveti tripsina (0,05%) 20 minut pri 37 ° C (po potrebi ponovite ta korak, če je potrebno zbrati več celic).

12. Sestavite celice iz drugega (in tretjih 20 minut) prebavil.

13. Prenašamo celično suspenzijo skozi 100 μm celično cedilo.

14. Fugirano filtrirano celično suspenzijo 8 minut pri 1200 RPM (150-200 g), sobno temperaturo.

15. Celično kroglico ponovno sperite s PBS in fuge.

16. Preštejte celice s hemocitometrom in priporočljivo je določiti sposobnost preživetja celic z izključitvijo barvila tripan modre barve, ki temelji na načelu, da imajo žive celice nedotaknjene celične membrane, ki izključujejo nekatera barvila, kot je npr. mrtve celice ne. Iz enega epitela lahko dobite kar 10-60 milijonov matičnih celic.

17. Pripravite medij za zamrzovanje. Protokol zamrznitve je iz najboljšega laboratorijskega priročnika, At the Bench: Laboratorijski navigator Kathy Barker: 1 ml / alikvot plus 10%. Sredstvo za zamrzovanje običajno vsebuje redno gojišče, 10-20% seruma in 5-10% glicerola ali DMSO.

18. Vsaka ampula bo vzela 1 - 10 (7) celic (ali med 4 - 10 (6) in 2 - 10 (7) celic) v 1 ml medija.

19. Peleto ponovno suspendirajte v zmrzovalnem mediju z nežno pipetiranjem.

20. Da bi se celice zamrznile postopoma in varno, jih namestite v -60 ° C ali manj in jih pustite tam od 16 do 24 ur.

21. Postavite alikvote s celicami v tekoči dušik in jih shranite. Kot pravi Charles Platt v knjigi Življenje in smrt pri nizki temperaturi (stran 56): »V večini urbanih območij je na voljo tekoči dušik (iskanje tekočih plinov) in je na splošno poceni. Je netoksičen, vendar ga je treba ravnati previdno, saj lahko njegova temperatura od -196 ° C povzroči resne poškodbe katerega koli izpostavljenega človeškega tkiva. Vedno nosite težke rokavice in zaščito za oči. "

22. Dajte zamrznjene celice zdravnikom, ko jih potrebujete za popravilo po X letih.

dobro: zamrznjeno

Delež

Pustite Komentar