Jeffrey Cross
Jeffrey Cross

Poceni DIY GFP (zelena fluorescentna beljakovina) iluminator

To ni bil nekakšen grozljiv fetiš, ki bi me prebral v reviji Worm Breeder.Namesto tega je govoril s Kathryn Hedges - pametnim, strastnim in dobro usposobljenim znanstvenikom in umetnikom - The Gazette's nasveti za poceni osvetljevalnik GFP. GFP ali zeleni fluorescenčni protein je fluorescenčni marker, ki se pogosto uporablja v molekularni biologiji in nevroznanosti.

V času svojega magistrskega študija na državni univerzi Humbolt je bila Kathryn, tako kot mnogi drugi znanstveni raziskovalci, izzvana z zmanjšanjem proračuna in težavami pri iskanju nepovratnih sredstev. Da bi nadaljevala z delom na nevronih nematodov v oddelku za denar, ko je imela potrebo po novi opremi za 11. uro, je Kathryn sprostila moč svojega »poglejmo, kako lahko to naredimo bolje in ceneje«, da bi zlomili DIY GFP osvetljevalnik v boljši, raziskovalno vredni sistem, ki je sposoben vizualizirati nevrone v drobnih črvah, dolgih samo 1 milimeter.

Zakaj je bilo to pomembno za Kathryn? Po njenih besedah: »eden od mojih sevov je izbiral proti GFP, če nisem izbral najsvetlejših črvov vsake generacije. Ne da bi videl GFP na mikroskopu »disekcija«, kjer sem pobiral posamezne črve z majhno žično lopatico, nisem mogel zagotoviti, da bi bilo vse njihovo potomstvo fluorescentno, kar je problem, ko poskušam videti, če zdravljenje jih poškoduje, tako da izgubijo fluorescenco. "

Rezultat: »Edini mikroskopi, ki smo jih imeli z zmožnostjo GFP, so bili neprimerni za povečevalne črve, medtem ko so jih premikali, in nakup primernega obsega bi stalo tisoče dolarjev. V svojem proračunu sem imel še 750 dolarjev, zato sem porabil približno 80 dolarjev za dele LED in zgradil osvetljevalnik. Ni bilo dovolj svetlo, da bi videl dolge tanke celice, zato sem porabil 825 $ na vrhunskih filtrih, rešil starega okularja za mikroskop kot fokusirno lečo in uporabil vodovodno okovje za montažo na mikromanipulator, ki smo ga imeli v laboratoriju. Potem sem lahko izbral svoje najsvetlejše črve, zanesljivo dvignil sijajne ličinke črva in končal svoje eksperimente. Če sem v GFP sledil večji funkciji ali sem uporabljal rdeč fluorescentni protein, bi verjetno lahko uporabljal poceni filtre in vse opravil pod 100 $. Če bi nadaljeval s poskusi, bi lahko uporabil ta osvetljevalnik pri prehodu GFP sevov, da bi videl, kateri potomci imajo oba GFP markerja. "

Kathrynin svetovalec je zagovarjal to vrsto eksperimentiranja, saj sta z lastnim mentorjem razvila lastno DIY opremo za zaznavanje hitrosti prevoda živcev v majhni sladki vodni anelid. Prototip še vedno visi na oglasni deski nad njegovo mizo. Ne samo, da študente fiziologije živali poučuje neinvazivno nevrofiziologijo, temveč tudi njegovi raziskovalci objavljajo članke z uporabo te metode za zbiranje podatkov. Je oboževalec boksa Spiker iz hrbtišča in upa, da ga bo videl v akciji.

Skozi njeno lastno orodje, ne da bi preživela previsoke stroške nakupa povprečnega osvetljevalca za tisoče dolarjev (celo uporabljenih), je Kathryn uspela dokončati svoje delo. Osvetljevalnik je uporaben za vse DIY znanstvenike, ki morajo pregledati izražanje GFP ali RFP (rdečih fluorescentnih proteinov) genov v bakterijah ali c. elegans. In Kathryn je dokaz, da lahko to storiš na deset centov.

Podrobnosti o osnovnem GFP iluminatorju od Gozdni list Worm Breeder so spodaj (po skoku). Če želite izvedeti več o Kathryninih izboljšavah in si ogledati njene opombe o črvih, si oglejte objavo na njej Čudovite barve.

[Zasluge za Ian Chin-Sang in Weiwei Zhong]

Uporaba LED kot poceni vir za zaznavanje GFP in DsRED

Ian Chin-Sang1 in Weiwei Zhong Oddelek za biologijo, Queen's University, Kingston, ON, Kanada, Oddelek za biokemijo in biologijo celic, Univerza Rice, Houston TX Korespondenca: Weiwei Zhong ([email protected])

Komponente za detekcijo fluorescence so predrage za vgradnjo v vsak stereoskop. Pogosto so naši fluorescentni markerji zelo svetli in ne zahtevajo polne zmogljivosti take opreme. Tukaj smo predstavili LED namestitev, ki stane le okoli 100 $ in lahko zazna svetle fluorescentne markerje, kot je myo-2 :: GFP. Nastavitev (slika 1) je sestavljena iz:

  • X-acto pomaga roke ali karkoli, kar lahko postavi LED (Amazon.com)
  • Kabel za žarnico, ki ima stikalo (lokalna strojna trgovina)
  • 17-vatni gonilnik Xitanium LED (napajalnik LED)
  • Xitanium gonilnik (napajalnik LED)
  • Hladilnik (napajanje LED)
  • Spot leča (napajanje LED)
  • Luxeon V Star optični nosilec (napajalnik LED)
  • Royal-Blue Luxeon V Star LED za detekcijo GFP (LED napajanje) ali zelena LED Luxeon Star za zaznavanje dsRED (napajanje LED)
  • Izbirni vzbujevalni filter: Roscolux # 4290 CalColor 90 Blue za GFP, ali # 389 Chroma Green za dsRED (Rosco.com | Edmund Optics)
  • Emisijski filter: Roscolux # 12 slama za GFP, ali # 19 Fire za dsRED (razpoložljivost enaka kot vzbujalni filtri)

Podrobnosti o tem, kako dejansko namestiti to napravo, lahko najdete tukaj in tukaj.

Slika 1. Nastavitev LED

Slika 2. Z nastavitvijo LED za zaznavanje myo-2 :: GFP v mIn1 živali.

Slika 3. Z nastavitvijo LED za zaznavanje myo-2 :: dsRED.

Ko sestavljate LED na voznika, se prepričajte, da se konča +/- na LED in nevtralni / linijski konci na kablu žarnice ustrezajo tistim na vozniku. Uporabite neprevodno lepilo, kot je silikonsko lepilo (Devcon, del št. 12045, lokalna strojna trgovina), da držalo objektiva postavite na LED. Vzbujevalni filter se lahko prilepi na lečo tako, da se na rob doda majhna količina lepila. Emisijski filter se lahko preprosto pritrdi pod mikroskopskim ciljem.

Ta nastavitev ima dolgo življenjsko dobo, ne potrebuje časa ogrevanja ali ohlajanja in nima sevanja. Vendar pa lahko zazna le močne signale. Nastavitev smo uporabili za zaznavanje naslednjih oznak: myo-2 :: GFP (slika 2), sur-5 :: GFP, ajm-1 :: GFP in myo-2 :: dsRED (sl. 3).

Uporaba LED kot poceni vir za zaznavanje GFP in DsRED


Bio: Eri Gentry je biotehnološki podjetnik, organizator državljanske znanstvene skupnosti in soustanovitelj BioCuriousa, prvega hekerja za biotehnologijo na območju San Francisco Bay Area.

Delež

Pustite Komentar